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点击次数：6755 发布时间：2021/11/24 15:43:01
为了转染raw 264.7小鼠巨噬单核细胞我们实验室尝试了lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等其它转染试剂，对于我们8000bp的质粒DNA基本转染后都没有荧光信号；师兄在中山大学的同学给我们推荐了他们实验室成功转染raw 264.7细胞的经验；
按照中山大学师兄给出的方法并结合我实验室情况我把自己在6孔板转染raw 264.7细胞的相关经验整理如下，希望对你转染raw 264.7细胞有一定的帮助，下面是我转染raw 264.7细胞的荧光和细胞明场图片，后期进一步优化后的新图片我也会随后呈上：
一、质粒DNA准备
1、质粒DNA浓度700ng/ul（注意：①溶解于无菌双蒸水或超纯水；②无内毒素），我用QIAGEN试剂盒除去的内毒素
二、操作流程
1、先将细胞接种到细胞培养板，细胞汇合度在70%左右，再进行转染。
2、复合物制备：将质粒DNA与Zeta Life，Advanced Transfection Reagent货号AD600150转染试剂按照1:1（12ug:12ul）关系直接混合，用移液器吹吸10-15次混匀，室温静止10-15分钟。
3、将复合物加入培养基的细胞培养板，并轻轻混匀，放入培养箱中继续培养（不建议把复合物加入到无血清的培养基里面，我后期会进一步摸索此条件）。
4、转染24小时后对细胞进行正常换液。
5、质粒DNA转染48小时后荧光检测转染效率
三、注意事项：
1本转染方法不适用在下面转染试剂的转染如：lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等转染试剂；
2细胞培养Zeta Life z7181-500胎牛血清，Gibco的DMEM;
四、RAW 264.7细胞简述：
RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞. 此细胞株源自雄性Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒，XC斑点形成试验阴性。 可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。 可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。
原创作者：上海创凌生物科技有限公司
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