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点击次数：3835 发布时间：2023/7/5 15:00:28
保存条件
室温保存一年。
自备材料
水浴锅或金属浴、无水乙醇、无 DNase 无 RNase 离心管、DNase I（2U/μL，或货号QR0102）使用方法
1. 样本处理
1.1 从动物组织中提取 RNA
1.1.1 取 20-100mg 样本放入液氮中充分研磨后，加入 700μL 裂解液 C，颠倒混匀。或者取 20-100mg 样本加入 700μL 裂解液 C，加入 1 颗钢珠，放入组织研磨器中，研磨1-2 分钟。备注：不同样本中 RNA 含量差异很大，过多使用样本容易导致堵塞，终导致RNA提取量下降。
1.1.2 55℃孵育 1 分钟。
1.1.3 12,000rpm 离心 1 分钟，取 500μL 上清。
1.1.4 加入 250μL 无水乙醇，充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。
1.2 从悬浮细胞中提取 RNA
1.2.1 细胞 1,000rpm 离心 5 分钟，收集细胞沉淀。
1.2.2 细胞数量为<5x106个时，加入 500uL 解液 C。细胞数量为 5x106~1x107个时，加入 700uL 裂解液 C。轻轻吹打混匀。55C孵育 1分钟。
1.2.3 12.000rpm 离心1 分钟。
1.2.4 细胞数量为 5×10 6个时，取 450μL 上清。细胞数量为 5×10 6~1×10 7个时，取650μL 上清。
1.2.5 加入 0.5 倍体积无水乙醇，充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。
1.3 从贴壁细胞中提取 RNA
1.3.1 胰酶消化细胞后 1,000rpm 离心 5 分钟，收集细胞沉淀。
1.3.2 细胞数量为<5×10 6个时，加入 500μL 裂解液 C。细胞数量为 5×10 6~1×10 7个时，加入700μL裂解液 C。轻轻吹打混匀。55℃孵育 1 分钟。 1.3.3 12,000rpm 离心 1 分钟。 1.2.4 细胞数量为><5×10 6个时，取 450μL 上清。细胞数量为 5×10 6~1×10 7个时，取650μL上清。1.2.5 加入 0.5 倍体积无水乙醇，充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。>为<5×10 6个时，取 450μL 上清。细胞数量为 5×10 6~1×10 7个时，取650μL上清。1.2.5 加入 0.5 倍体积无水乙醇，充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。
2. RNA 纯化
2.1 全部加入 RNA 吸附柱中，12,000rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中废液。
2.2 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗涤液 CW1，12,000rpm 离心 30 ，倒掉收集管中废液。
2.3 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗涤液 CW2，12,000rpm 离心 30 ，倒掉收集管中废液。
2.4 重复步骤 2.3 一次。
2.5 12,000rpm 离心 2 分钟，倒掉收集管中废液。
2.6 将 RNA 吸附柱放入无 DNase 无 RNase 离心管中，加入 30-50μL 洗脱液C，室温放置1 分钟。
2.7 12,000rpm 离心 2 分钟，得到 RNA 溶液，-80℃保存。
注意事项
1. 务必在超净台中进行操作，常换手套，防止 RNA 降解。
2. 尽可能使用新鲜样本进行 RNA 提取。
3. 使用无 DNase 无 RNase 的吸头和离心管，防止 RNA 降解，常更换吸头，防止交叉污染。
4. 为了提高洗脱效率，可提将洗脱液 C 置于 65℃水浴后再使用。
5. 根据后续试验需求，请使用 DNase I（货号 QR0102）进行基因组清除。
原创作者：上海创凌生物科技有限公司
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