试剂盒应用

本试剂盒针对哺乳动物细胞、组织开发的裂解液DC，在10 分钟内完成细胞和组织的裂解、提取和纯化。使用硅基DNA 纯化柱，结合基因组DNA，从而获得纯度高，产量高的基因组DNA。提取的基因组DNA 完整性高，适合PCR、qPCR、酶切、克隆、Southern 杂交、文库构建等。本试剂盒仅供研究使用，不可用于临床、食品、化妆品等域。

保存条件

室温保存一年。

自备材料

水浴锅或金属浴、无水乙醇、无DNase 无RNase 离心管、RNaseA（10mg/mL，或货号QR0101）。

使用方法

1. 样本处理

1.1 从动物组织中提取DNA

1.1.1 取20-100mg 样本放入液氮中充分研磨，加入700μL 裂解液DC，充分混匀，室温作用1 分钟。

或取20-100mg 样本加入700μL 裂解液DC，加入1 颗钢珠，放入组织研磨器中，研磨1-2 分钟。

备注：不同样本中DNA 含量差异很大，过多使用样本容易导致堵塞，终导致DNA 提取量下降。

1.1.2 55℃孵育1 分钟。

1.1.3 12,000rpm 离心1 分钟。取500μL 上清。

1.1.4 （选做）加入5μL RNase A（10mg/mL），室温静置5-10 分钟。

1.1.5 加入250μL 无水乙醇，充分混匀。按照步骤2.1-2.7 操作。

1.2 从细胞中提取DNA

1.2.1 悬浮细胞1,000rpm 离心5 分钟，收集细胞沉淀。

或者贴壁细胞经过胰酶消化后1,000rpm 离心5 分钟，收集细胞沉淀。

1.2.2 细胞数量<5×106 个时，加入500μL 裂解液DC。细胞数量为5×106~1×107 个时，加入700μL 裂

解液DC。轻轻吹打混匀，55℃孵育1 分钟。

1.2.3 12,000rpm 离心1 分钟。

1.2.4 细胞数量<5×106 个时，取450μL 上清。细胞数量为5×106~1×107 个时，取650μL 上清。

1.2.5（选做）加入5μL RNase A（10mg/mL），室温静置5-10 分钟。

1.2.6 加入0.5 倍体积无水乙醇，充分混匀。按照步骤2.1-2.7 操作。

2. DNA 纯化

2.1 全部转移到DNA 吸附柱中，12,000rpm 离心1 分钟，倒掉收集管中废液。

2.2 向DNA 吸附柱中加入500μL 洗涤液DCW1，12,000rpm 离心30 ，倒掉收集管中废液。

2.3 向DNA 吸附柱中加入500μL 洗涤液DCW2，12,000rpm 离心30 ，倒掉收集管中废液。

2.4 重复步骤2.3 一次。

2.5 12,000rpm 离心2 分钟，倒掉收集管中废液。

2.6 将DNA 吸附柱放入新无DNase 和无RNase 离心管，加入30-50μL 洗脱液C，室温放置1 分钟。

2.7 12,000rpm 离心2 分钟，得到DNA 溶液，-80℃保存。

注意事项

1. 经常更换手套，防止DNA 污染。

2. 使用无DNase 无RNase 的吸头和离心管，防止DNA 降解。

3. 常更换吸头，防止交叉污染。

4. 动作轻柔，防止基因组DNA 断裂。

5. 为了提高洗脱效率，可提将洗脱液C 置于65℃水浴后再使用。