上海徕创生物科技有限公司

当前位置:首页>技术文献

293无血清培养基使用之细胞复苏方法

阅读人数:887 发布时间:2018/4/9 13:10:43

293无血清培养基使用之细胞复苏,徕创生物为您介绍细胞复苏的流程:

1)迅速取出冻存的细胞,在37℃水浴条件下进行解冻(可以在水中轻轻晃动,时间控制在60s以内);

2)轻轻地混匀细胞并将融化的细胞全部移至15ml无菌离心管中,逐滴加入10ml预热到37℃的培养基,离心换液(100g,5min)去除全部上清,加入新鲜培养基重悬,使得细胞密度达到0.4-0.66cells/ml;

3)将细胞置于37℃,5%CO2,转速为110-175rpm的恒温摇床中进行培养;

4)2-4天后通过人工或仪器测定细胞的密度及活率,如果细胞密度达到1.0*106cells/ml,活率达到85%以上则可进行传代培养;

5)如果细胞密度低于1.0*106cells/ml,则建议对细胞进行离心(100g,5min),然后重悬于20-30ml的新鲜培养基中使得细胞密度为0.4-0.6*106cells/ml左右,并继续培养至细胞正常生长则可进行传代培养。

293无血清培养基描述:

Balance CD 293 培养基适用于悬浮培养条件下的HEK293细胞(如293-F,293-T, Expi-293F

等)的高密度生长和瞬时转染表达。 Balance CD 293 培养基含有细胞生长所需的全部营养成份,无需添加任何添加物即可使用。(注意:此培养基不包含抗生素以及血清)

293无血清培养基特点:

瞬时转染专用培养基,适用于HEK293细胞高密度悬浮培养

无蛋白、无动物源、化学成分限定

即用型完全培养基,无需添加额外成分

以上为293无血清培养基使用之细胞复苏的方法,如需了解更多请联系徕创生物!

产品使用方法:

细胞驯化

1)直接驯化

大部分情况下,培养于其他培养基中的细胞,可以直接适应Balance CD 293 medium,只要按照日常传代方式(稀释)更换培养基即可。

2)渐进式驯化

注意:选用低代次、处于对数生长期的细胞进行驯化

①在原培养基中复苏细胞并继续使用该培养基传代2到3次至细胞生长稳定,当细胞密度达到2x10 6 cells/ml后进行传代,传代细胞密度控制在0.5-0.6×10 6 cells/mL,5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为75:25;

②将细胞置于37℃,5% CO2,转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养;

③当细胞密度3-4天后达到3x10 6 cells/ml且细胞活率>90%,传代时5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为50:50,细胞密度控制在0.5×10 6 cells/mL。如细胞生长慢,可离心上清,留20%条件培养基,加入80%的5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293 培养基比例为75:25的混合培养基,继续培养;

④重复步骤③逐步增加Balance CD 293培养基所占的比例(5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293 培养基的比例为25:75至10:90)直到100%的Balance CD 293培养基;

⑤经过在100%的 Balance CD 293 培养基中的几次传代培养,传代后3-4天细胞的密度可以达到2-3×10 6  cells/mL,细胞活率大于90%,这说明细胞已经完全适应了Balance CD 293 培养基。之后进行细胞的传代培养时,细胞的起始密度可以降到0.3×10 6 cells/mL,一般传代2-3次后再进行转染实验。

注意: 一般细胞驯化过程中,前三代细胞的状态可能不是很好,但一般从第四代状态会有改善。

细胞传代

1)取细胞培养样品,人工或仪器测定细胞密度以及活率;

2)计算传代所需的细胞用量,建议起始细胞密度为0.2-0.4×10 6 cells/mL。建议复苏的细胞至少培养两代后再用于其他用途。传代培养体积建议为15-20 mL(100 mL的培养瓶)或50-60 mL(250 mL 的培养瓶);

3)将细胞置于37℃,5%CO2,转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养,3-4天传代一次。

细胞转染在Balance CD 293培养基中,采用商业化转染试剂(例如 Gibco 293Fectin™ExpiFectamine™ 293 Transfection Kit )或 PEI 可以实现对 HEK293 细胞的高效转染。

原创作者:上海徕创生物科技有限公司

在线询价

电话咨询

我要询价X

产品名称:

您的称呼:

您的电话:

您的单位:

您的要求:

  验证码:

提交