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真假胎牛血清及择取胎牛血清质量区别

阅读人数:1457 发布时间:2018/3/23 12:59:45

近日,实验室的细胞培养人员抱怨培养瓶中在显微镜的观察下有若干小蠕虫爬动,徕创生物提示您,这是黑胶虫,可以说,这样的细胞培养瓶可以说废弃了,连二次实验的价值都没,话说黑胶虫难道是实验室的操作不当,如添加细胞因子,小分子化合物等中出现了人为的环境污染?不是的,黑胶虫产生的致命原因是假的胎牛血清导致!

据病毒所和军科院鉴定是一种寄生于牛血清内的一种原虫,似乎和草履虫和变形虫有类似之处,然而由于课题经费不够而不能继续进行下去。

在细胞培养的时候,有时会在400倍显微镜下看到小黑点在动,小黑点有时呈点状,有时呈小的片状,运动形式为在原地振动(类似布朗运动),这种小黑点既不是细菌、霉菌,也不是支原体(我们曾经请周守长用血平板培养过,没有菌落出现),目前业内人士称其为黑胶虫

国内的血清中,通常灭活之后都会有絮状沉淀出现,而黑胶虫出现时,所使用的血清被反复冻融过多次。所以推测,所谓的黑胶虫其实就是血清中的某些蛋白成分的物质,经过灭活之后丧失活性,在培养基中,镜检见到的运动其实是这些物质在溶液中做布朗运动。随着细胞消耗培养基,这些物质越来越多,最后细胞所用的营养消耗完,细胞容易死亡。

市场上的胎牛血清种类繁多,鱼龙混杂,很多科研工作者,特别是刚接触细胞培养的人,难以分辨血清质量的优劣,假的胎牛血清,导致黑胶虫的现象越明显总结如下:
一、外观

拿到血清,最先接触的是血清外观,对于缺少细胞培养经验的人来说,外观的判断尤为重要

1、颜色

根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或红色,我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl,实际上,血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响,这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度,良好的操作能降低血清的溶血。

国产血清的采血点很分散,大多是由屠户采血后马上离心收集,所以很少会有溶血,表现出明亮的蜡黄色,当然,国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。

进口胎牛血清或多或少总有点溶血,因为真正的胎牛血清凝血功能差,红细胞容易破裂。

总的来说,国产的血清呈现出蜡黄。进口的血清,质量的呈现出谈黄、微红色,如Gibco 16000,差点的呈现出橘红色或鲜红色。当然,热灭活血清或保存不当的血清,由于血红蛋白的破坏氧化,会呈现出暗红,甚至咖啡色。

2、沉淀

很多血清客户,会发现进口血清有沉淀,从而怀疑血清的质量问题,这是没有根据的。

血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生,对血清质量没有任何影响,沉淀的产生原因很多,和厂家的加工生产方式密切相关。

国产的血清,大多来自北方,由于价格低廉,保存环境都不好,从采血、冷冻、运输到生产会经过多次冻融,每次冻融过程,就会析出部分纤维蛋白沉淀,这样,血清成品过滤后看起来反而更加的干净,很少有沉淀产生。

进口的胎牛血清,过滤分装前很少会反复冻融,生产后的成品也是清澈的,但随着时间的推移,血清中的大量纤维蛋白会析出形成沉淀。当然,进口的新生牛血清,一般牛龄都在2周左右,血清中的各种蛋白含量明显偏高,生产后血清可能会浑浊,甚至有大量沉淀。

当然,购买回来的血清都是冰冻状态,使用时需要融化,融化过程在温度较低的状态下慢慢进行,否则沉淀相对较多,虽然沉淀并不直接影响血清的质量,但对细胞的显微观察有一定的阻碍。

3、澄清度

进口胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低,表现为稀薄、清淡,而国产血清,因为绝大多数是新生牛血清,相对而言更加粘稠,颜色略深,这对于初步接触血清的人很难判断,但把两者进行对比,可容易分辨。

二、主要技术指标

目前国内血清的质量标准是2005版的《中华人民共和国药典》,主要指标有以下几点:

1、内毒素

标准为不高于5EU/ml。内毒素是细菌破碎后细胞壁的成分,因此内毒素含量的高低可表现出采血到生产一系列过程中的无菌操作情况。目前,国产血清基本都能达到这一要求,很多进口胎牛血清内毒素含量反而更高,如Gibco 26140,只要求不高于50EU/ml,高出我国标准10倍,即使是16000,也要10EU/ml,血清质量也未见影响。可见,内毒素含量偏高不影响质量,除非含量极高,预示着已经污染。

2、总蛋白含量

胎牛血清一般范围是30-40mg/ml,数值偏高,说明采血的牛龄偏大,不是胎牛,数值偏低,表明血清可能掺水了。

3、血红蛋白

标准为不高于20mg/dl,颜色越红,数值越高,反之,数值越低。

4pH

国产血清,大多高于7.5,进口胎牛血清,大多低于7.5,具体原因未知,可能和牛龄有关,这也能用来初步鉴别血清的来源。

5、微生物

包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性病毒等。随着国内血清厂家生产条件的改善提高,细菌、霉菌等大型微生物几乎能100%控制,支原体经过0.1um过滤,大多也能清除。大肠杆菌噬菌体的污染还是比较严重的,主要是生产环境过程中带入,又无法过滤,很难彻底清除,但对血清质量影响不大。病原性病毒,特别是BVDV,在国产血清中几乎90%以上都存在,这类微生物是影响国产血清质量的重要因素之一,而进口胎牛血清中基本都控制的很好。

6、免疫球蛋白

国产血清的只是定性检测,结果也很不准确,进口胎牛血清大多定量检测。免疫球蛋白的数值能完全体现出采血的时的牛龄情况,国产血清,基本都是新生牛的,血清中容易产生IgMIgG的含量也偏高,进口胎牛血清,不含IgMIgG的含量也较低。

7、其它

不管是国产还是进口血清,都是不测抗生素的(无四环素胎牛血清除外)。国外,抗生素的使用很严格,用量也很少,每头奶牛的产品包括血清都可以溯源的,因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量极低;国内,抗生素的滥用已成了普遍现象,血清中残留很高,对细胞培养极为不利,这是国产血清质量差的根本原因。

三、血源

市场上的血清血源主要分为中国、北美、南美和澳洲。

1、国产血清质量差,这是公认的,主要原因并不是生产厂家的责任,而是天然环境差和抗生素的大量使用。国内环境污染严重,同时饲养过程中抗生素极其滥用,有毒有害物质会大量残留在血清中,最终不利于细胞的生长。

2、南美血清,来源很多,如Bioind的以色列巴拿马(04-001-1A/B04-121-1A/B04-001AUS-1A/B04-002-1A/B04-222-1A/B04-011-1A/B04-201-1A/B04-400-1A/B) Gibco的乌拉圭、巴西等,这些血清由于采血的不可控性,质量参差不齐,当然,相对于国内血清来说好的多。另外,国内销售的南美血清大多颜色鲜红,如BioindGibcoHylone等品牌,但阿根廷的血清例外,这可能和各国的采血、生产工艺有关。

3、北美血清,主要来自美国和加拿大,如HcloneSH30396SH30070SH30071Gibco16000-04426140-079等。这类血清,等级越高的颜色越淡,表现为淡黄中带一点微红,SH30070SH30396对比就很明显,特级胎牛血清基本就能进行干细胞培养。北美血清还有一个显著特点就是每瓶血清都能溯源,这对一些大型的疫苗厂、药厂尤为重要。

4、澳洲血清,来源主要是新西兰和澳大利亚,这是在北美血清禁运之后进入中国市场的,一般不具有溯源功能,由于生产、运输等原因,价格相对来说比较贵。拿Gibco1009916000相比较,后者质量等级更高,颜色更淡,性价比更高。

一、特级类胎牛血清(别的,专用于干细胞的胎牛血清)
 1Hyclone 北美特级胎牛血清(SH30070.03
目前,性能的血清,实验室反馈不错的,那就是Hyclone SH30070.03的特级胎牛血清, Hyclone头牌
这款血清--Hyclone特级胎牛血清(Defined FBS),货号:SH30070,是世界上唯一经过40纳米过滤的顶级胎牛血清,极佳的促细胞生长作用及产品稳定性。内毒素含量小于10EU/ml,血红蛋白含量小于10mg/dl。此血清可以广泛用于各种细胞培养,包含任何干细胞系的培养。
2Gibco北美特级胎牛血清(16000-044
invitrogen公司在美国原装生产的特级胎牛血清,货号:16000-044,是100nm过滤3次,内毒素和血红蛋白含量都可以与HycloneSH30070.03相媲美。也可以用于培养大部分的干细胞系。
二、优等类胎牛血清
1Hyclone加拿大优等胎牛血清(SH30396
性价比的是Hyclone加拿大优等胎牛血清(Characterizend FBS),货号:SH30396,血清采自加拿大,由Hyclone公司总部的员工采集加工,采集方法,加工过程,检定标准与美国原产优等胎牛血清完全一致,市场价格低于美国原产的。经过3100nm过滤,内毒素含量小于25EU/ml,血红蛋白含量小于25mg/dl。此血清,在2005年以前,是很多实验室选择血清的首选,价格适中,质量过硬,应用细胞非常广泛。
2Hyclone澳大利亚优等胎牛血清(SH30084

基本与加拿大的优等血清是一样的,级别也非常相似,各种级别都有。
3Gibco澳大利亚胎牛血清(10099-141Hyclone澳大利亚胎牛血清差不多,市场价也是3200/500ml左右。这一级别的血清,也能用于干细胞培养,可是,不象特级胎牛血清那么优秀。
三、普通进口胎牛血清 Hyclone南美胎牛血清(SV30087
目前市场上用的最多的Hyclone血清是南美胎牛血清(FBSSV30087 ,此血清采自南美,在国内(兰州)过滤并测试检验,经三次100纳米过滤,根据中国商标法的规定标贴中文标签,内毒素含量小于等于10EU/ml,血红蛋白含量小于等于20mg/d。此血清广泛用于各种肿瘤细胞的培养,还没有资料记载能够用于干细胞,也听说有少数人用于干细胞培养的,不过,因为本身血红素比较高,所以,不要用于干细胞,
四、国产的各种系列胎牛血清
国产的胎牛血清,国内没有严格意义的胎牛血清,胎牛血清本身是需要穿刺取血的,而国内都是剖腹产出胎牛,8小时左右取血,然后,进行过滤分装。所以,国产的胎牛血清不是严格意义的胎牛血清。不过也很多实验室使用,具体情况那就看实验的要求了。
五、其他血清
新生牛血清,小牛血清,一般国产的,效果也还是不错的,不过,不要用于细胞培养,这些血清,大多是用于封闭液、保护液、缓冲液等等用途的。

徕创生物为ZETA LIFE 公司上海区域代理,为您提供优质血清。

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ZETA LIFE公司成立于1989年,曾为日本临床单克隆抗体生产商MBL Biotech公司提供13年的生产血清经验。也是目前世界血清OEM供应商之一。每批血清均有完成的血源证明文件、兽医师检验证明及品管测试报告。专人负责测试追踪、建档,能轻易帮您挑选合适的批号。

该血清在登记100级的无菌操作室内,均采用全自动方式制造生产,具有良好的可再现性以及可追溯性。

 

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